普通光学显微镜的使用技术 - 分析行业新闻

　　一，普通光学显微镜的主要构造

　　普通光学显微镜的构造主要分为三部分：机械部分、照明部分和光学部分。显微镜各部分构造如下图：

　　1.机械部分

　　（1）镜座：是显微镜的底座，用以支持整个镜体。

　　（2）镜柱：是镜座上面直立的部分，用以连接镜座和镜臂。

　　（3）镜臂：一端连于镜柱，一端连于镜筒，是取放显微镜时手握部位。

　　（4）镜筒：连在镜臂的前上方，镜筒上端装有目镜，下端装有物镜转换器。

　　（5）物镜转换器(旋转器)：接于棱镜壳的下方，可自由转动，盘上有3－4个圆孔，是安装物镜部位，转动转换器，可以调换不同倍数的物镜，当听到碰叩声时，方可进行观察，此时物镜光轴恰好对准通光孔中心，光路接通。

　　（6）镜台(载物台)：在镜筒下方，形状有方、圆两种，用以放置玻片标本，中央有一通光孔，我们所用的显微镜其镜台上装有玻片标本推进器(推片器)，推进器左侧有弹簧夹，用以夹持玻片标本，镜台下有推进器调节轮，可使玻片标本作左右、前后方向的移动。

　　（7）调节器：是装在镜柱上的大小两种螺旋，调节时使镜台作上下方向的移动。

　　 ①粗调节器(粗螺旋)：大螺旋称粗调节器，移动时可使镜台作快速和较大辐度的升降，所以能迅速调节物镜和标本之间的距离使物象呈现于视野中，通常在使用低倍镜时，先用粗调节器迅速找到物象。

　　 ②细调节器(细螺旋)：小螺旋称细调节器，移动时可使镜台缓慢地升降，多在运用高倍镜时使用，从而得到更清晰的物象，并借以观察标本的不同层次和不同深度的结构。

　　2．照明部分

　　装在镜台下方，包括反光镜，集光器。

　　（1）反光镜：装在镜座上面，可向任意方向转动，它有平、凹两面，其作用是将光源光线反射到聚光器上，再经通光孔照明标本，凹面镜聚光作用强，适于光线较弱的时候使用，平面镜聚光作用弱，适于光线较强时使用。

　　（2）集光器(聚光器)位于镜台下方的集光器架上，由聚光镜和光圈组成，其作用是把光线集中到所要观察的标本上。

　　①聚光镜：由一片或数片透镜组成，起汇聚光线的作用，加强对标本的照明，并使光线射入物镜内，镜柱旁有一调节螺旋，转动它可升降聚光器，以调节视野中光亮度的强弱。

　　②光圈(虹彩光圈)：在聚光镜下方，由十几张金属薄片组成，其外侧伸出一柄，推动它可调节其开孔的大小，以调节光量。

　　3.光学部分

　　（1）目镜：装在镜筒的上端，通常备有2－3个，上面刻有5×、10×或15×符号以表示其放大倍数，一般装的是10×的目镜。

　　（2）物镜：装在镜筒下端的旋转器上，一般有3－4个物镜，其中*短的刻有“10×”符号的为低倍镜，较长的刻有“40×”符号的为高倍镜，*长的刻有“100×”符号的为油镜，此外，在高倍镜和油镜上还常加有一圈不同颜色的线，以示区别。

　　在物镜上，还有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高， 各物镜的镜口率如下表：

　　物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm)

　　10× 0.25 5.40

　　40× 0.65 0.39

　　100× 1.30 0.11

　　 表中的工作距离是指显微镜处于工作状态(物象调节清楚)时物镜的下表面与盖玻片(盖玻片的厚度一般为0.17mm)上表面之间的距离，物镜的放大倍数愈大，它的工作距离愈小。

　　显微镜的放大倍数是物镜的放大倍数与目镜的放大倍数的乘积，如物镜为10×，目镜为10×，其放大倍数就为10×10=100。

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　　4，成像系统 在使用过程中，为了方便观察，通常会在光学显微镜目镜上加装成像系统，将显微镜视野内的图像通过成像系统传送到电子显示屏上，更好地对显微镜视野内的标本进行观察。如下图所示：

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　　二，水浸片的制作

　　 在水产疾病的诊断过程中，使用得*多的是将病料组织制成水浸片，放在载物台上观察，详细的制作步骤如下：

　　 取一块干净的载玻片，在上面滴一滴清水（如果是利用与水直接接触的组织或器官制作水浸片，淡水品种就使用淡水，海水品种就使用海水，如果是利用不与水接触的组织器官制作水浸片，则要使用生理盐水），首先从要检查的部位取一小块组织，至于载玻片的水滴中，用镊子夹住轻轻搅动，让其分散，再取一洁净的盖玻片将其一边与载玻片接触，倾斜着将盖玻片轻盖在待检组织上，再用镊子或铅笔轻压，让待检组织分散。如果水过多，可以用纱布或吸水纸吸去盖玻片周围多余的水。这样，一个水浸片就制成了。

　　 在制作水浸片的过程中，要注意以下几点：

　　 1，所取的待检组织的样品不宜过多，过多容易引起透光率的不良，影响显微镜的观察。

　　 2，必须先滴水，再放组织，否则会产生气泡，影响观察。

　　 3，水产动物不与水接触的组织器官要用生理盐水，否则检查的病原体会由于渗透压的不同引起碎裂，皱缩或死亡而影响诊断。

　　 4，水浸片要现场制作，不宜保存。

　　三，普通光学显微镜的使用步骤。

　　1、实验时要把显微镜放在座前桌面上稍偏左的位置，镜座应距桌沿 6～7 cm左右。

　　2、打开光源开关，调节光强到合适大小。

　　3、转动物镜转换器，使低倍镜头正对载物台上的通光孔。先把镜头调节至距载物台1～2cm左右处，然后用左眼注视目镜内，接着调节聚光器的高度，把孔径光阑调至*大，使光线通过聚光器入射到镜筒内，这时视野内呈明亮的状态。

　　4、将所要观察的玻片放在载物台上，使玻片中被观察的部分位于通光孔的正中央，然后用标本夹夹好载玻片。

　　5、先用低倍镜观察（物镜10X、目镜10X）。观察之前，先转动粗动调焦手轮，使载物台上升，物镜逐渐接近玻片。需要注意，不能使物镜触及玻片，以防镜头将玻片压碎。然后，左眼注视目镜内，同时右眼不要闭合（要养成睁开双眼用显微镜进行观察的习惯，以便在观察的同时能用右眼看着绘图），并转动粗动调焦手轮，使 载物台慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。

　　6、如果在视野内看到的物像不符合实验要求（物像偏离视野），可慢慢调节载物台移动手柄。调节时应注意玻片移动的方向与视野中看到的物像移动的方向正好相反。如果物像不甚清晰，可以调节微动调焦手轮，直至物像清晰为止。

　　7、如果进一步使用高倍物镜观察，应在转换高倍物镜之前，把物像中需要放大观察的部分移至视野中央（将低倍物镜转换成高倍物镜观察时，视野中的物像范围缩小了很多）。一般具有正常功能的显微镜，低倍物镜和高倍物镜基本齐焦，在用低倍物镜观察清晰时，换高倍物镜应可以见到物像，但物像不一定很清晰，可以转动微动调焦手轮进行调节。

　　8、在转换高倍物镜并且看清物像之后，可以根据需要调节孔径光阑的大小或聚光器的高低，使光线符合要求（一般将低倍物镜换成高倍物镜观察时，视野要稍变暗一些，所以需要调节光线强弱）。

　　9、观察完毕应先将物镜镜头从通光孔处移开，然后将孔径光阑调至*大，再将载物台缓缓落下，并检查零件有无损伤，特别要注意检查物镜是否沾水沾油，如沾了水或油要用镜头纸擦净，检查处理完毕后即可铺上防尘布。

　　四，显微镜不同倍数镜头的使用方法

　　1．低倍镜的使用方法

　　（1）取镜和放置：显微镜平时存放在柜或箱中，用时从柜中取出，右手紧握镜臂，左一手托住镜座,将显微镜放在自己左肩前方的实验台上，镜座后端距桌边1－2寸为宜，便于坐着操作。

　　（2）对光：用拇指和中指移动旋转器(切忌手持物镜移动)，使低倍镜对准镜台的通光孔(当转动听到碰叩声时，说明物镜光轴已对准镜筒中心)。打开光圈，上升集光器，并将反光镜转向光源，以左眼在目镜上观察(右眼睁开),同时调节反光镜方向，直到视野内的光线均匀明亮为止。

　　（3）放置玻片标本：取一玻片标本放在镜台上，一定使有盖玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器弹簧夹夹住，然后旋转推片器螺旋，将所要观察的部位调到通光孔的正中。

　　（4）调节焦距：以左手按逆时针方向转动粗调节器，使镜台缓慢地上升至物镜距标本片约5毫米处，应注意在上升镜台时，切勿在目镜上观察。一定要从右侧看着镜台上升，以免上升过多，造成镜头或标本片的损坏。然后，两眼同时睁开，用左眼在目镜上观察，左手顺时针方向缓慢转动粗调节器，使镜台缓慢下降，直到视野中出现清晰的物象为止。

　　 如果物象不在视野中心，可调节推片器将其调到中心(注意移动玻片的方向与视野物象移动的方向是相反的)。如果视野内的亮度不合适，可通过升降集光器的位置或开闭光圈的大小来调节，如果在调节焦距时，镜台下降已超过工作距离(>5.40mm)而未见到物象，说明此次操作失败，则应重新操作，切不可心急而盲目地上升镜台。

　　2．高倍镜的使用方法

　　（1）选好目标：一定要先在低倍镜下把需进一步观察的部位调到中心，同时把物象调节到*清晰的程度，才能进行高倍镜的观察。

　　（2）转动转换器，调换上高倍镜头，转换高倍镜时转动速度要慢，并从侧面进行观察(防止高倍镜头碰撞玻片)，如高倍镜头碰到玻片，说明低倍镜的焦距没有调好，应重新操作。

　　（3）调节焦距：转换好高倍镜后，用左眼在目镜上观察，此时一般能见到一个不太清楚的物象，可将细调节器的螺旋逆时针移动约0.5－1圈，即可获得清晰的物象(切勿用粗调节器!)

　　如果视野的亮度不合适，可用集光器和光圈加以调节，如果需要更换玻片标本时，必须顺时针(切勿转错方向)转动粗调节器使镜台下降，方可取下玻片标本。

　　3．油镜的使用方法

　　（1）在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。

　　（2）将集光器上升到*高位置，光圈开到*大。

　　（3）转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。

　　（4）用左眼观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。

　　如果不出现物象或者目标不理想要重找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。

　　（5）油镜使用完毕，先用擦镜纸沾少许二甲苯将镜头上和标本上的香柏油擦去，然后再用干擦镜纸擦干净。

　　五，显微镜使用的注意事项

　　（一）、 正确安装的问题

　　 使用显微镜前，首先要把显微镜的目镜和物镜安装上去。目镜的安装较为简单，主要的问题在于物镜的安装，由于物镜镜头较贵重，万一安装时螺纹没合好，易摔到地上，造成镜头损坏，所以为了保险起见，强调操作者在安装物镜时要用左手食指和中指托住物镜，然后用右手将物镜装上去，这样即使没安装好，也不会摔到地上。

　　（二）、正确对光的问题

　　 对光是使用显微镜时很重要的一步，有些操作者在对光时，随便转一个物镜对着通光孔，而不是按要求一定用低倍镜对光。转动反光镜时喜欢用一只手，往往将反光镜扳了下来。所一定要强调用低倍镜对光，当光线较强时用小光圈、平面镜，而光线较弱时则用大光圈、凹面镜，反光镜要用双手转动，当看到均匀光亮的圆形视野为止。光对好后不要再随便移动显微镜，以免光线不能准确地通过反光镜进入通光孔。

　　（三）、正确使用准焦螺旋的问题

　　 使用准焦螺旋调节焦距，找到物象可以说是显微镜使用中*重要的一步，也是操作者感觉*为困难的一步。操作者在操作过程中极易出现以下错误：一是在高倍镜下直接调焦；二是不管镜筒上升或下降，眼睛始终在往目镜中看视野；三是不了解物距的临界值，物距调到2~3厘米时还在往上调，而且转动准焦螺旋的速度很快。前两种错误结果往往造成物镜镜头抵触到装片，损伤装片或镜头，而第三种错误则是操作者使用显微镜时*常见的一种现象。针对以上错误，操作者要注意，调节焦距一定要在低倍镜下调，先转动粗准焦螺旋，使镜筒慢慢下降，物镜靠近载玻片，但注意不要让物镜碰到载玻片，在这个过程中眼睛要从侧面看物镜，然后用左眼朝目镜内注视，并慢慢反向调节粗准焦螺旋，使镜筒徐徐上升，直当看到物像为止。一般显微镜的物距在1厘米左右，所以如果物距已远超过1厘米，但仍未看到物像，那可能是标本未在视野内或转动粗准焦螺旋速度过快，此时应调整装片位置，然后再重复上述步骤，当视野中出现模糊的物像时，就要换用细准焦螺旋调节，只有这样，才能缩小寻找范围，提高找到物像的速度。

　　（四）、物镜转换的问题

　　 使用低倍镜后换用高倍镜，操作者往往喜欢用手指直接推转物镜，认为这样比较省力，但这样容易使物镜的光轴发生偏斜，原因是转换器的材料质地较软，精度较高，螺纹受力不均匀很容易松脱。一旦螺纹破坏，整个转换器就会报废。操作者应手握转换器的下层转动板转换物镜。

　　（五）、正确用眼的问题

　　 用显微镜观察物体时，应双眼同时睁开，左眼往目镜内注视。但有不少操作者往往做不到这一点，喜欢用手捂住右眼或干脆闭上右眼，这是不符合实验的观察要求的，这种不良习惯会造成左眼疲劳，同时也不能做到边观察边画图。应该注意，左眼要尽量贴近目镜，右眼试图向视野内注视，如此反复训练，就会达到双目同时睁开观察的要求。或者也可以通过做以下练习：睁开双眼，用一张纸或手掌竖立在两眼之间，鼻子跟前，使左右眼不能互看对侧一边，然后有意识地先看左边，再看右边，如此3~5次，每天早晚各做一遍，不到一星期便可学会。

　　（六）视野内污点判断的问题

　　转动目镜，污点移动则在目镜上。不移动则不在目镜上

　　移动玻片，污点移动则在玻片上。不移动则不在玻片上

　　如果视野内的污点不在玻片和目镜上，那就在物镜上。

　　（七）显微镜视野内玻片的移动与物像的移动

　　由于是倒立的像，玻片的移动方向与物像移动的方向相反。

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　　（八）使用过程中其他需要注意的问题

　　1．持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方。

　　2．轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。

　　3．保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。

　　4．水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和镜台，如果沾污应立即擦净。

　　5．放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。

　　6．要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野，右眼用以绘图。

　　7．不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。

　　8．使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内，其步骤是：取下标本片，转动旋转器使镜头离开通光孔，下降镜台，平放反光镜，下降集光器(但不要接触反光镜)、关闭光圈，推片器回位，盖上绸布和外罩，放回实验台柜内。*后填写使用登记表。(注：反光镜通常应垂直放，但有时因集光器没提至应有高度，镜台下降时会碰坏光圈，所以这里改为平放。